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荧光强度为纵坐标作图

文章出处:赢多多官网 人气:发表时间:2021-01-26 13:52

  原子荧光光谱仪_物理_自然科学_专业资料。第一节 荧光光谱分析仪 一、概 述 ? 荧光:某些物质吸收光能量后,可发射波长与 激发光波长相同或不同的光,当激发光源停止 照射试样时,再发射过程立即停止,这种再发 射的光称为荧光(fluores

  第一节 荧光光谱分析仪 一、概 述 ? 荧光:某些物质吸收光能量后,可发射波长与 激发光波长相同或不同的光,当激发光源停止 照射试样时,再发射过程立即停止,这种再发 射的光称为荧光(fluorescence)。荧光包括 分子荧光和原子荧光。 ? 荧光分析法:通过测定物质分子产生的荧光强 度进行物质的定性与定量分析的方法。 ? 荧光光谱仪:采用荧光分析法来测量的仪器。 一、概 述 ? 荧光产生机制 物质的分子吸收了照射光的能 量后,处于基态最低能级的分子被激发到电 子激发态的各个振动能级。被激发的分子与 周围的分子碰撞,并把部分能量以热能的形 式传给周围的分子,自己降落到单线第二电 子激发态的最低振动能级。然后,由此最低 振动能级向基态的各个振动能级跃迁,同时 以发光的形式释放出其能量。这种光即为荧 光。 一、概 述 1.振动弛豫 2.内转换 3.猝灭 4.系间跨越 s单重态 T多重态 ?1 ,?2激发波长; 荧光 ?3磷光 分子去活化过程及荧光产生示意图 一、概 述 ?荧光分析的特点 ?优点:灵敏度高(可达10~12g数量级); 选择性强,有利于分析复杂的多组分混合物; 用样量少、特异性好、操作简便。 ?缺点:对温度、pH值等因素变化比较敏感; 应用范围较窄,只能用来测量发荧光的物质, 或与某些试剂作用后发荧光的物质。 二、荧光分析的基本原理 (一)激发光谱和荧光光谱 ? 任何发射荧光的物质都具有两个特征光谱, 即激发光谱(excitation spectrum)和荧光光 谱(fluorescence spectrum)。 ? 激发光谱和荧光光谱是荧光分析中定性和定量 的基础。 ? 激发光谱:连续改变激发光波长,固定荧光发 射波长,测定不同波长的激发光照射下,物质 溶液发射的荧光强度的变化。 ? 以激发光波长为横坐标,荧光强度为纵坐标作 图,即可得到荧光物质 的激发光谱。 从激发光谱图上可找到 发生荧光强度最强的 激发波长λex。 ? 荧光光谱:用λex作激发光源,并固定强度,测 定不同波长的荧光强度。 ? 以荧光波长为横坐标,荧光强度为纵坐标作图, 便得荧光光谱。荧光强度最强的波长为λem 。 ? 荧光物质的λex和λem 是鉴定物质的依据,也 是定量测定中所选用的 最灵敏的波长。 (二)物质的分子结构和荧光的关系 ? 强荧光物质的分子结构特征: ①具有大的共轭π- π双键结构,共轭体系越大, 越容易产生荧光; ②具有刚性平面结构; ③具有最低的单线为π- π型; ④若取代基团为给电子取代基,荧光强度增加。 三、荧光光谱仪的原理与分类 ? 荧光光谱仪的工作原理 ? 在激发光的频率、强度以及液层厚度不变 的情况下,荧光物质所发射的荧光强度与溶液 的浓度成正比。因此,可以通过测定荧光强度 来求出该物质的含量。 ? 荧光分析法所测量的是待测物质所发射的 荧光强弱,属于发射光谱分析,荧光光度计和 荧光分光光度计属于发射光谱仪器。 三、荧光光谱仪的原理与分类 ? 荧光光谱仪分类 ? 荧光光度计(fluorophotometer):采用滤光片 做单色器,结构较简单,功能也较差。 ? 荧光分光光度计(fluorospectrophotometer): 采用棱镜或光栅为色散元件,结构较复杂,功能较 强,但价格远远高于荧光光度计。 三、荧光光谱仪的原理与分类 ?FP-6500荧光分光光度计 三、荧光光谱仪的原理与分类 Jasco FP8500 荧光光谱仪 三、荧光光谱仪的原理与分类 ARL 9800 系列 X射线荧光光谱仪 三、荧光光谱仪的原理与分类 ? 荧光光谱仪的主要结构 ? 激光光源: ? 单色器: ? 样品池: ? 检测器: ? 记录显示系统: 四、荧光光谱仪的结构 0.20 8 光源 激发单色器 吸收池 发射单色器 检测放大系统 荧光光度计结构示意图 荧光分光光度计光路图 PF8500 荧光光谱仪的性能指标主要包括: ?灵敏度:800:1 ?波长范围:Ex:200-850nm Em:200-850nm ?波长精度:±0.3nm ?分辨率:1nm ?光谱带通:0.3nm ?信噪比 ?灵敏度 ? 灵敏度是指能被仪器检出的最低信号,或某一标准 荧光物质稀溶液在选定波长的激发光照射下能检出 的最低浓度,是仪器最重要的性能指标之一。 ? 多数荧光光谱仪的灵敏度较高,可达10-10g~1012g水平,有利于检测体液中的微量物质。 ?波长范围 ? 波长范围指荧光光谱仪的有效工作波段,包括激发 通道波长范围、投射通道波长范围和荧光通道波长 范围。 ? 波长范围越大,应用范围越广。 ? 一般荧光分光光度计都采用氙灯作光源,光栅为单 色器分光元件,其有效工作波段在200nm~ 1000nm范围之内。 ?波长精度 ? 指其波长计数器的指示值与真实光波长的数值相符 的程度。 ? 特定的激发波长和发射波长是定性分析和定量测定 的基础,因此波长精度也是荧光光谱仪的核心指标 之一。 ? 目前荧光分光光度计的波长精度误差在± (0.2nm~2nm)范围之内。 ?分辨率 ? 指荧光仪器对靠近的峰尖分开的能力,它与波长精 度有密切关系,决定着对混合物成分分析特异性的 好坏。 ? 常用仪器的分辨率在0.2nm~5nm之间,主要由 光栅的每毫米刻线数决定。 ?光谱带通 ? 指仪器主机狭缝宽窄程度的指数。 ? 以一定狭缝几何密度对应的光谱半宽度来直接表示 光谱纯度。 ? 光谱纯度直接影响仪器的分辨率、灵敏度以及背景 干扰。 ? 目前的荧光分光光度计的光谱带通在0.15nm~ 20nm之间,一般都采用连续可调方式。 ?信噪比与响应速度 ? 用空白样品测得的峰值叫做噪声峰值,待测样品测 得的峰值和噪声峰值之比就叫做信噪比。 ? 信噪比越高,检测结果的准确性也越高。 ? 仪器的响应速度是指电路样品通道对光电信号反映 的快慢。响应

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